Desenvolvimento e otimização de uma nova metodologia para determinação de antidepressivos em plasma com extração por MEPS e análise por GC-MS/MS

Abstract

O consumo de antidepressivos constitui uma problemática mundial e Portugal apresenta uma das taxas de doenças mentais mais elevadas da Europa1. A monitorização terapêutica está estabelecida para um pequeno número de medicamentos para os quais se verifica uma relação direta entre concentração e efeito farmacológico. Este trabalho tem como objetivo desenvolver uma metodologia para deteção de antidepressivos (fluoxetina, venlafaxina, citalopram, sertralina, paroxetina e metabolitos) em 250 μL de plasma por microextração em seringa empacotada (MEPS) e cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massa em tandem (GC-MS/MS). A técnica de MEPS foi otimizada utilizando a ferramenta estatística Design of Experiments e o número de strokes foi o único fator significativo. O procedimento final de extração foi: adicionar 250 μL de amostra com 500 μL de acetonitrilo, centrifugar, decantar e evaporar; dissolver o resíduo com 1 mL de tampão fosfato 25 mM (pH 5), adicionar o padrão interno e homogeneizar; acondicionamento com 250 μL de metanol e 250 μL de 0,1% de ácido fórmico em H2O; loading de 12x150 μL de amostra; lavagem de 4x50 μL com 1% de ácido fórmico em H2O; secagem por aspiração de 4x50 μL de ar; eluição de 6x100 μL com 1% de hidróxido de amónia em metanol; evaporar até a secura, derivatizar durante 2 minutos com microondas a 800 W e injetar 2 μL no sistema cromatográfico. Foram obtidas recuperações entre 12-93% e limites de quantificação entre 10-100 ng/mL. Este é o primeiro trabalho a utilizar a MEPS e GC-MS/MS na determinação de antidepressivos e metabolitos em amostras de plasma.