Validação de metodologia analítica para doseamento de biomarcadores de etanol em sangue por LA-MS/MS - Vilas Boas, Ana; Franco, João Miguel; Carmo, Helena; Melo, Paula (My University, 2025)
O abuso e a dependência de álcool são bastante comuns e têm elevado impacto em questões de saúde e sociais. Desta forma, torna-se importante o desenvolvimento de metodologias para identificar casos de alcoolismo agudo e/ou crónico ou para confirmar a abstinência de etanol em determinadas situações médico-legais. Uma vez que o etanol é rapidamente eliminado do organismo, a validação de metodologias analíticas para a quantificação dos seus biomarcadores de exposição torna-se bastante útil em toxicologia forense, nomeadamente em contextos laborais, em casos de regulação do poder paternal e em situações post-mortem, auxiliando na distinção entre a ingestão e a formação post-mortem de etanol. Os autores apresentam a validação de metodologia analítica para a quantificação de etil-glucuronídeo e etil-sulfato em amostras de sangue, por LC-MS/MS. O método está a ser validado num equipamento de cromatografia líquida Exion LC da Sciex acoplado a um detetor de massa QTrap 6500+, da Sciex, sendo as amostras previamente submetidas a um procedimento de precipitação proteica com metanol. A separação cromatográfica é efetuada recorrendo a uma coluna Acquity UPLC HSS T3 (2,1*100mm; 1,8 µm de tamanho de partícula), usando como fase móvel uma mistura de ácido fórmico 0,1% e metanol, em gradiente. A deteção dos compostos é efetuada por MRM, sendo a ionização feita por electrospray, em modo negativo, utilizando duas transições para cada um dos compostos e respetivos padrões internos. O método demonstrou ser específico e seletivo. Para os limites de deteção e quantificação foi assumido o valor de 100 ng/mL para os dois compostos, apesar da determinação destes através do método do desvio padrão residual e declive da curva de calibração ter resultado em valores inferiores. O rendimento de extração foi calculado a 2 níveis de concentração, 700 ng/mL e 3000ng/mL tendo-se obtido resultados médios de 82% para o etil-glucuronídeo e de 99% para o etil-sulfato. A linearidade foi avaliada entre as concentrações de 100 e 10000 ng/mL, tendo sido estudados vários fatores de ponderação. A veracidade e precisão encontram-se em fase de avaliação. A determinação destes biomarcadores associada à determinação direta do etanol, contribuirá para uma resposta mais abrangente em contexto forense, permitindo detetar a exposição ao etanol com maior sensibilidade.
Poster apresentado no 22º Congresso Nacional de Medicina Legal e Ciências Forenses, Estoril, 17-19 out 2024
Keywords: Biomarcadores Etanol; LC-MS/MS